Cómo hacer diluciones seriadas

En química, la dilución es el proceso que reduce la concentración de una sustancia en una solución. Una dilución seriada es la disolución repetida de una solución para ampliar el factor de dilución rápidamente. Se realiza normalmente en experimentos que requieren soluciones muy diluidas con gran precisión, como las relacionadas con curvas de concentración en una escala logarítmica o con experimentos para determinar la densidad de bacterias. Las diluciones en serie son ampliamente utilizadas en las ciencias experimentales como bioquímica, microbiología, farmacología y física.

Pasos

Método 1
Realizar una dilución básica

Imagen titulada Do Serial Dilutions Step 1
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Determina el líquido de dilución adecuado. El líquido en que vas a diluir tu sustancia es muy importante. Muchas soluciones serán diluidas en agua destilada, pero no siempre es este el caso. Si vas a diluir bacterias u otras células, probablemente quieras hacerlo en caldos de cultivo. El líquido que escojas será utilizado para cada dilución en serie.
  • Si no tienes claro cuál líquido utilizar, pide ayuda o busca en internet si otras personas han llevado a cabo una dilución similar.
  • Imagen titulada Do Serial Dilutions Step 2
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    Prepara varios tubos de ensayo con 9 ml del líquido de dilución. Estos recipientes actuarán como tus diluciones de valores en blanco. Añadirás tu muestra sin diluir al primer tubo y luego irás diluyendo en serie en los demás tubos.
  • Es útil etiquetar tu tubos de ensayo antes de comenzar, así no te confundirás cuando hayas comenzado las diluciones.
  • Cada tubo de ensayo estará diez veces más diluido que el anterior, comenzando por el tubo sin diluir. El primer tubo contendrá una dilución de 1:10, el segundo de 1:100, el tercero de 1:1000, y así sucesivamente. Decide de antemano la cantidad de diluciones que necesitarás para no desperdiciar tubos de ensayo o líquido de dilución.
  • Imagen titulada Do Serial Dilutions Step 3
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    Prepara un tubo de ensayo que contenga al menos 2 ml de tu solución sin diluir. La cantidad mínima necesaria para llevar a cabo esta dilución en serie es 1 ml de solución sin diluir. Si nada más tienes 1 ml, no te quedará nada de solución sin diluir. Etiqueta este tubo SSD por solución sin diluir.
  • Mezcla minuciosamente la solución antes de comenzar cualquier dilución.
  • Imagen titulada Do Serial Dilutions Step 4
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    Realiza la primera dilución. Extrae 1 ml de la solución sin diluir del tubo de ensayoSSD con una pipeta y transfiérelo al tubo de ensayo etiquetado 1:10, que contendrá 9 ml del líquido de dilución y mézclalo minuciosamente. Ahora tienes 1 ml de la solución sin diluir en 9 ml del líquido de dilución. Por tanto, la solución ha sido diluida por factor de diez.
  • Imagen titulada Do Serial Dilutions Step 5


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    Realiza la segunda dilución. Para la segunda dilución en serie, debes tomar 1 ml de la solución del tubo1:10 y añadirlo a la dilución de 9 ml del tubo 1:100. Mezcla rigurosamente el tubo 1:10 antes de añadirlo al tubo siguiente. También mezcla rigurosamente el tubo de ensayo 1:100 luego de realizar la dilución. La solución del tubo de ensayo 1:10 fue diluido por un factor de diez en el tubo de ensayo 1:100.
  • Imagen titulada Do Serial Dilutions Step 6
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    Extiende este procedimiento para realizar mayores diluciones en serie. Este proceso puede repetirse tantas veces sea necesario para obtener la solución deseada. En un experimento relacionado con las curvas de concentración, puedes utilizar una dilución en serie para crear una serie de soluciones con disoluciones de 1, 1:10, 1:100, 1:1000.
  • Método 2
    Calcular el factor y concentración final de la dilución

    Imagen titulada Do Serial Dilutions Step 7
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    Calcula la proporción final de la dilución en una dilución en serie. La proporción total de la dilución puede determinarse al multiplicar el factor de dilución de cada paso hasta llegar al último. Esto puede ser matemáticamente ilustrado por la ecuación Dt = D1 x D2 x D3 x … x Dn donde Dt es el factor total de la dilución y Dn es la proporción de la dilución.
    • Por ejemplo, digamos que realizaste una dilución en 1:10 de tu líquido 4 veces. Añade tu factor de dilución en la ecuación:Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10000
    • El factor final de dilución del cuarto tubo de ensayo de tu dilución en serie es 1:10 000. La concentración de tu sustancia es ahora 10 000 veces menor que la de la solución original sin diluir.
  • Imagen titulada Do Serial Dilutions Step 8
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    Determina la concentración de la solución luego de la dilución. Para determinar la concentración final de tu solución luego de una dilución en serie tendrás que saber la concentración inicial que utilizaste. La ecuación para esto es Cfinal = Cinitial/D donde Cfinal es la concentración final de la solución diluida, Cinitial es la concentración inicial de la solución original y D es la proporción de la dilución que determinaste anteriormente.
  • Por ejemplo, si comenzaste con una solución de células con una concentración de 1 000 000 de células por ml y tu proporción de dilución es 1000, ¿cuál es la concentración final de tu muestra diluida?
  • Utilizando la ecuación:
  • Cfinal = Cinitial/D
  • Cfinal = 1 000 000/1000
  • Cfinal = 1000 células por ml.
  • Imagen titulada Do Serial Dilutions Step 9
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    Comprueba que todas las unidades concuerden. Cuando realices cualquier cálculo, debes asegurarte de que tus unidades siempre concuerden al final. Si comenzaste con células por ml asegúrate que terminas con células por ml. Si tu concentración inicial es unidades por millón (upm), tu concentración final debe estar dada en upm.
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